Анализ крови на сифилис

Собственно говоря,  этот анализ не один – их несколько. Для выявления сифилиса кровь исследуют несколькими способами. Помимо крови в лабораторной диагностике этого заболевания  используют и другой биологический материал, в котором содержится возбудитель,  бледная спирохета  (син. –  бледная трепонема).

Это отделяемое из сифилидов (специфических изъязвлений и высыпаний на коже и слизистых), при нейросифилисе — спинномозговая жидкость (ликвор).

Анализ крови на сифилис

Анализ крови на сифилис

Виды исследований

Все методы диагностики сифилиса можно разделить на прямые и непрямые. Прямые методы направлены  на непосредственное обнаружение бледной трепонемы. Что касается непрямых, то они основаны на обнаружении антител к спирохете. Есть антитела, значит, есть и сама спирохета. Непрямые методы диагностики сифилиса – это не что иное, как серологические реакции, в которых в качестве исследуемого материала используется сыворотка крови.

Антитела обнаруживаются при их взаимодействии с антигенами. Для  проведения серологических реакций используются препараты, содержащие заданный антиген. В зависимости от типа этого антигена серологические реакции могут быть трепонемными и нетрепонемными. В трепонемных реакциях участвует антиген, специфичный для бледной трепонемы.

К трепонемным реакциям относят:

  • РСК – реакцию связывания комплемента с трепонемным антигеном
  • РПГА – реакцию пассивной гемагглютинации
  • ИФА – иммуноферментный анализ
  • РИФ – реакцию иммунофлуоресценции
  • РИБТ – реакцию иммобилизации бледных трепонем
  • Иммуноблоттинг.

К нетрепонемным серологическим реакциям относят реакцию связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном и реакцию микропреципитации или тест быстрых плазменных реагинов.

Используемый в этих реакциях  кардиолипиновый антиген не является антигеном бледной спирохеты. Это экстракт из бычьего сердца, по своей структуре сходный с кардиолипин-фосфолипидныс антигеном клеточной мембраны спирохет.

Поэтому антитела, вырабатывающиеся при появлении возбудителя сифилиса, будут реагировать и на этот антиген.

Когда говорят об анализе на сифилис, то чаще всего подразумевают именно этот метод, реакцию Вассермана

Когда говорят об анализе на сифилис, то чаще всего подразумевают именно этот метод, реакцию Вассермана

Реакция Вассермана (RW)

Когда говорят об анализе на сифилис, то чаще всего подразумевают именно этот метод, реакцию Вассермана. Данная реакция была разработана для диагностики сифилиса немецким иммунологом Вассерманом более столетия назад, еще в самом начале прошлого века. Однако ее проводят и сегодня, правда, с существенными изменениями.

По сути своей RW в нынешнем варианте относится к РСК. Под комплементом в иммунологии подразумевают систему плазменных белков, которые формируют врожденный иммунитет. RW основана на реакции антигенов с антителами с участием комплемента. Антитела к бледной трепонеме присутствуют в сыворотке больного сифилисом. Если к такой сыворотке добавить антигены, то антитела вступят с ними в реакцию.

Для RW используют уже готовые наборы специфических и неспецифических антигенов. Специфические антигены выделены из культур бледной трепонемы, выращенных на питательных средах.

Неспецифические антигены представлены кардиолипином бычьего сердца. Таким образом, RW можно отнести и к трепонемным, и к нетрепонемным исследованиям.

Реакция специфических и неспецифических антигенов с антителами исследуемой сыворотки внешне не видна.  Для ее индикации используют бараньи эритроциты.

В  составе гемолитической сыворотки иммунизированного кролика их добавляют к исследуемому материалу. Что же получается в  конечном итоге?

Если исследуемый здоров, то антитела к трепонеме в его сыворотке отсутствуют. При этом под действием комплемента бараньи эритроциты гемолизируются (разрушаются), и это отчетливо видно в пробирке, содержимое которой равномерно окрашено без осадка («лаковая кровь»).

Таким образом, гемолиз  говорит об отсутствии антител. В этом случае реакция отрицательная.

У больных сифилисом все наоборот. У них весь комплемент связывается при образовании иммунных комплексов антигенов с антителами, и его на разрушение эритроцитов, попросту говоря, не хватает.

Поэтому отсутствие гемолиз свидетельствует о наличии антител к спирохетам, и, соответственно, о сифилисе. В этом случае реакция положительная, и ее обозначают знаком плюс.

Точнее, плюсов может быть несколько, ведь задержка гемолиза имеет различную степень выраженности:

  • 1 плюс – реакция сомнительная
  • 2 плюса – реакция слабоположительная
  • 3 плюса – реакция положительная
  • 4 плюса – реакция резкоположительная.

На медицинском сленге плюсы в данном случае именую крестами, и результат обозначают соответственно: +, ++, +++ или ++++.

Методика RW довольно проста, недорога, занимает немного времени, и не требует сложного лабораторного  оборудования. Поэтому к данной реакции прибегают повсеместно, причем  не только при наличии конкретных показаний (подозрение на сифилис, наличие характерных симптомов).

Ее проводят в качестве скринингового метода при плановых профосмотрах, беременным при постановке на учет, всем пациентам при госпитализации в стационар.

Между тем, методика не лишена существенных недостатков. Во-первых, она не всегда дает положительный результат при имеющемся сифилисе. Ведь антитела формируются не сразу, а спустя некоторое время.

Этот промежуток времени, когда нет антител, именуют серонегативным периодом сифилиса, и длится он 5-8 нед. с момента заражения.

А серопозитивный период сифилиса начинается уже в конце первичного сифилиса. Вторичный сифилис практически всегда серопозитивен, а третичный осложненный  сифилис может быть серонегативным. В данном случае это вовсе не говорит о том, что бледной трепонемы нет в организме. Просто иммунная система за долгие годы истощилась, и антитела перестали выделяться.

С другой стороны, в ряде случаев даже после успешного лечения сифилиса  1-2 креста в анализе могут сохраняться долгие годы, а иногда и пожизненно.

Таким образом, количество крестов в RW не зависит от активности бледных трепонем и тяжести течения сифилиса.  Для этого используют другой показатель – титр антител. Это максимальная  степень разведения сыворотки, при которой имеется резкоположительная реакция.

Еще один недостаток RW  – ее низкая специфичность с  частыми ложноположительными результатами, когда идет задержка гемолиза при отсутствии сифилиса.

Среди причин ложноположительных результатов – другие бактериальные и вирусные инфекции, системные коллагенозы, беременность, алкоголизм, наркомания, прием лекарств, погрешности в питании, и многое другое. Поэтому очень важно правильно подготовится к анализу.

За 7-10 дней до взятия крови прекращают прием антибиотиков. В течение последних суток нужно воздержаться от приема обильной, жирной пищи, алкоголя.

Кровь для анализа берется из вены натощак. Отрицательные результаты при отсутствии характерных клинических проявлений в виде твердого шанкра с большой степенью достоверности свидетельствуют об отсутствии сифилиса. При наличии хотя бы одного из крестов прибегают к другим методам диагностики.

Реакция пассивной гемагглютинации заключается в склеивании или агглютинации эритроцитов.

Реакция пассивной гемагглютинации заключается в склеивании или агглютинации эритроцитов.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Реакция пассивной гемагглютинации заключается в склеивании или агглютинации эритроцитов. На используемых в этой реакции эритроцитах фиксируют трепонемные антигены. Затем к этому материалу добавляют исследуемую сыворотку.

Если в ней содержатся антитела, то они вступают  во взаимодействие с антигенами на эритроцитах, что приводит к их агглютинации. Таким образом, агглютинация свидетельствует о положительной РПГА и об имеющемся сифилисе, а отсутствие агглютинации и отрицательная РПГА о том, что обследуемый здоров. Здесь также имеется 4 степени положительного результата с различным титром антител.

Чувствительность РПГА более высокая в сравнении с RW. Однако и этот анализ отрицателен в самом начале заболевания, в течение первых 2-4 нед., а иногда и 6 нед. В дальнейшем, во вторичном и третичном периоде, РПГА всегда положительная, как и при латентном сифилисе.

Поэтому  ее можно использовать для диагностики  заболевания без четких клинических проявлений.  Подобно другим трепонемным исследованиям РПГА остается положительной пожизненно, даже после полного излечения. Поэтому ее нельзя использовать для оценки адекватности лечения сифилиса.

Отрицательной она может стать лишь в тех случаях, когда лечебные мероприятия начали проводиться сразу же, как только пациент заболел сифилисом.

РПГА также дает ложноположительные результаты при некоторых заболеваниях и патологических состояниях. От истинных положительных результатов ложноположительные отличаются тем, что они очень быстро, спустя несколько недель или месяцев становятся отрицательными.

Причем происходит это спонтанно, даже без  специфического лечения. РПГА также относится к скрининговым методам диагностики. При положительном результате проводят другие трепонемные анализы.

Иммуноферментный анализ также основан на реакции антиген-антитело.

Иммуноферментный анализ также основан на реакции антиген-антитело.

Иммуноферментный анализ ИФА

Иммуноферментный анализ также основан на реакции антиген-антитело. Трепонемные антигены фиксируют  на поверхности какого-либо твердого материала.

Как правило, это полистирол, из которого изготовлены современные тест-системы, имеющие вид планшетов с лунками. В эти лунки добавляют исследуемую сыворотку. Если в этой сыворотке имеются антитела, то они образуют с антигенами тест-систем комплексы.

Далее для того чтобы обнаружить комплекс антиген-антитело,  к исследуемому материалу добавляют сыворотку с антителами мечеными ферментом пероксидазой и хромогеном, веществом, играющим роль индикатора.

Желтое окрашивание исследуемого материала указывает на наличие антител. Чем  больше этих антител, тем интенсивнее окрашивание.

Антитела относятся к иммуноглобулинам (Ig), и представлены несколькими разновидностями – IgА, IgМ, и  IgG. Их количество  неодинаково в различные периоды заболевания. Поэтому по преобладанию того или иного Ig можно судить о давности заболевания.

ИФА становится положительной уже с 3 нед., и может оставаться таковой до конца жизни. Однако здесь тоже нередки ложноположительные результаты, что является существенным недостатком.

Среди достоинств ИФА –  доступность метода  и возможность проводить большое количество исследований за относительно короткий срок.

Реакция иммунофлуоресценции основана на световой индикации комплекса антиген-антитело

Реакция иммунофлуоресценции основана на световой индикации комплекса антиген-антитело

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

Реакция иммунофлуоресценции основана на световой индикации комплекса антиген-антитело.  Имеющийся антиген смешивают с  исследуемой сывороткой. Если в ней присутствуют антитела, то они образуют с антигенами иммунные комплексы.

После этого к диагностируемому материалу добавляют антивидовую кроличью сыворотку, содержащую флуоресцеин, вещество, светящееся в ультрафиолетовом свете. Свечение обнаруживается при осмотре в люминесцентный микроскоп.

В зависимости от интенсивности свечения, цвет которого варьирует от едва заметного до желто-зеленого,  выделяют 4 степени положительной РИФ.

Достоинства этого метода – его специфичность и чувствительность. При имеющемся сифилисе РИФ дает положительный результат в самом начале заболевания, уже к концу 1 нед. инфицирования, еще до того как появился шанкр.

Ложноположительные результаты практически не выявляются. Среди недостатков данного метода – технические сложности и необходимость специального оборудования.

Поэтому к РИФ прибегают при положительных результатах других анализов, нуждающихся в уточнении.

Реакция иммобилизации бледных трепонем  основана на феномене обездвиживания, иммобилизации возбудителя в присутствии исследуемой сыворотке.

Реакция иммобилизации бледных трепонем основана на феномене обездвиживания, иммобилизации возбудителя в присутствии исследуемой сыворотке.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Реакция иммобилизации бледных трепонем  основана на феномене обездвиживания, иммобилизации возбудителя в присутствии исследуемой сыворотке. В сыворотке пациента, больного сифилисом имеются антитела-иммуноглобулины, которые называют иммобилизинами из-за их способности обездвиживать спирохеты.

Иммобилизины выделяются гораздо позже, чем другие антитела, и РИБТ дает положительный результат лишь спустя 3 мес. после инфицирования.

Метод надежен, высокочувствителен, и мог бы использоваться при ложноположительных результатах других исследований. Однако он сложен в техническом отношении, долго проводится, требует дорогостоящего оборудования и специально обученного персонала.

Поэтому РИБТ, разработанная еще в середине прошлого века, в настоящее время с в клинической практике не используется. Ее проводят лишь в научно-исследовательских целях.

Микрореакция преципитации имеет еще одно название – тест быстрых плазменных реагинов

Микрореакция преципитации имеет еще одно название – тест быстрых плазменных реагинов

Микрореакция преципитации МП

Микрореакция преципитации имеет еще одно название – тест быстрых плазменных реагинов. В ответ на поврежденные компоненты клеточных мембран тканей  или на компоненты мембран самих трепонем иммунная система выделяет антитела, именуемые реагинами.

На обнаружении этих реагинов и основан данный метод диагностики. К заданному антигену, включающему в себя холестерин, кардиолипин и лецитин, добавляют частицы угля для индикации.

Затем антиген смешивают с исследуемой  сывороткой. Если в ней содержатся реагины, происходит реакция флоккуляции с образованием хлопьевидного осадка, который из-за присутствия частиц угля имеет черный цвет.

Положительной  результат МП может отмечаться не ранее чем спустя 4-5 нед. после инфицирования. Как и при других серологических реакциях, здесь может быть неодинаковая  степень выраженности и различный титр реагиновых антител.

По мере развития патологического процесса титр антител нарастает, но на поздних стадиях он снижается, и реакция становится слабоположительной или сомнительной. К тому же у этого метода исследования тоже много ложноположительных результатов.

К достоинствам можно отнести то, что на основании теста быстрых плазменных реагинов можно судить о течении заболевания и об эффективности его лечения. Ведь здесь используется нетрепонемный антиген, и после того как трепонема уничтожена, результат МП становится отрицательным, в то время как у других серологических реакций с трепонемными антигенами он может сохраняться пожизненно.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг

Данный метод сочетает в себе электрофорез и ИФА. Бледные трепонемы под действием электрофореза разделяются на антигенные фракции. Затем полученный материал обрабатывают сывороткой пациента, которая при заболевании сифилисом содержит специфические иммуноглобулины, IgM и IgG. После этого добавляют сыворотку с антителами к этим иммуноглобулином, меченную радиоизотопами или ферментами.

При этом участки, содержащие эти иммуноглобулины, принимают вид характерных полосок. Иммуноблоттинг – современный метод диагностики сифилиса, который был разработан сравнительно недавно. Он чувствителен и достоверен, но требует дорогостоящего оборудования, и потому недешев.

В настоящее время к иммуноблоттингу в основном прибегают для диагностики врожденного сифилиса.

микроскопия

микроскопия

Микроскопия

При стандартной микроскопии спирохеты трудноразличимы, т.к. они очень плохо окрашиваются. Именно поэтому спирохету и назвали бледной. Лучше всего микроскопию проводить в темнопольном микроскопе.

В отличие от обычного микроскопа боковое освещение здесь сфокусировано так чтобы выделить светящиеся трепонемы на темном фоне.

Материалом для исследования служит отделяемое шанкра, элементы кожной сыпи. Поэтому темнопольную микроскопию в основном используют для диагностики первичного и вторичного сифилиса.

На стадии третичного сифилиса, осложненном нейросифилисом, трепонемы могут быть обнаружены в ликворе, а при врожденном сифилисе – в тканях пуповины.

Визуальное обнаружение трепонем – это достоверный признак сифилиса. Тем не менее, возбудитель может быть выявлен не всегда, а лишь в 80% случаев.

При длительно протекающем сифилисе с проведением специфического лечения и обработке антисептиками патологических участков кожи и слизистых вероятность обнаружения трепонем в темнопольном микроскопе снижается.

Для более эффективной диагностик  трепонемы могут обрабатываться флуоресцентными антителами, которые фиксируются на них и дополнительно усиливают свечение. Но этот метод требует дополнительных материальных затрат.

Полимеразная цепная реакция

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция  основана на обнаружении микробного возбудителя (в данном случае – трепонемы) по его ДНК. Весь генетический материал многократно размножается с участием фермента ДНК-полимеразы. Затем с помощью электрофореза находят ДНК трепонем.

Чувствительность ПЦР максимальна, ведь обнаружение цепи микробной ДНК  свидетельствует о сифилисе. ПЦР  можно использовать для диагностики любых стадий сифилиса.

В зависимости от стадии заболевания и его осложнений в роли биологического материала может выступать кровь,  моча, ликвор, ткани лимфоузлов, отделяемое сифилидов. Чувствительность этих материалов к ПЦР может быть различной.

Больше всего трепонем в отделяемом сифилидов, а в уретральном или вагинальном мазке они могут вообще не обнаруживаться. К тому же после успешного лечения в организме в течение некоторого времени часто  сохраняются фрагменты погибших трепонем, ДНК которых тоже идентифицируется ПЦР.

Поэтому с помощью данного метода не всегда можно определить, имеется ли активная фаза заболевания, или оно уже на стадии излечения. Тем не менее, ПЦР является наиболее эффективным методом диагностики сифилиса. Его применение тормозится  сложностью исполнения и необходимостью дорогостоящего оборудования.

Какой анализ самый лучший?

Все зависит от стадии заболевания. При первичном серонегативном сифилисе наиболее предпочтительна темнопольная микроскопия и РИФ. Далее, при первичном серопозитивном и вторичном сифилисе проводят RW и ИФА, а для исключения ложноположительных результатов их дополняют РПГА.

В третичном периоде RW отрицательна, а РПГ и ИФА положительны. Для исключения ложноположительных результатов их дополняют РИФ. Для диагностики врожденного сифилиса обследуют и мать, и новорожденного. Женщина обследуется на RW, РПГА и РИФ. У новорожденного диагностика  может быть дополнена иммуноблоттингом. Во всех спорных случаях прибегают к  ПЦР.

Читайте также:

Повышенный гемоглобин - хорошо или плохо
Анализ крови может быть использован для диагностирования Альцгеймера на ранних стадиях заболевания
Общий анализ крови – норма и расшифровка
Биохимический анализ крови - норма и расшифровка
Простой анализ крови может определить весь вирусный анамнез
Анализ крови для обнаружения рака поджелудочной железы на ранней стадии
Анализы крови на  маркеры вирусных гепатитов
Анализ крови на онкомаркеры
Отзывы и трекбеки отключены.